关于免疫组化SABC法的一些疑惑?实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津:比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/30 20:35:11
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关于免疫组化SABC法的一些疑惑?实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津:比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及
关于免疫组化SABC法的一些疑惑?
实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津:
比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及定量,那么我的简单理解是:用动物A中的生长抑制素(纯抗原)去接种动物B,使其产生单克隆性的一抗(1种效应B淋巴细胞产生的),再用此单克隆性一抗接种动物C,使其产生相应的多克隆性抗体(此抗体是多种效应B淋巴细胞产生的)(另外就是未用一抗接种动物C时,动物C的血清液可作为封闭液),把二抗和生物素结合上,与二抗结合的生物素再和霉链亲和素结合(霉链亲和素能与4个生物素结合),霉链亲和素再结合另外三个生物素,另外的三个生物素外连接的是辣根过氧化物酶,最后又辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺(DAB)得棕色沉淀物而显色.
有几点疑惑:
1.这套技术最根本的起点是抗原,那这个抗原一般是在动物组织中哪?比如我认为:生长抑制素可在分泌该物质的细胞的细胞基质中(核膜、细胞膜上不知会不会附着),组织液中,前者的话,我觉得,这样定位、定量才有意义,就是把原细胞定出来了,若是后者的话有何意义?其它像什么5-HT,NPY等呢?
2.关于未经一抗免疫处理的封闭液血清(和二抗是相同动物的来源)怎么就能封闭掉原抗原动物体内对一抗的非特异性吸附呢?封闭液血清的封闭原理?
关于免疫组化SABC法的一些疑惑?实验技术是免疫组化SABC法,最近一直在试图彻底弄懂这套技术的整个原理,仍有几点疑惑,望大家能为我指点迷津:比方说我要做的是对动物A生长抑制素的定位及
你说的这么多到底是要问啥哦 能简而言之么 那什么抗体的制备过程根本和你没有关系啊 不是什么抗原接种什么乱七八糟的 而是直接把组织拿来做切片 然后在切片上做整个免疫组化过程 不是在动物体内好不好