询问PCR退火温度设计引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+):68.2Tm(50mM Na+):46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+):66.2Tm(50mM Na+):44.6顺便问下大家,Tm(1
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/27 14:52:15
![询问PCR退火温度设计引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+):68.2Tm(50mM Na+):46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+):66.2Tm(50mM Na+):44.6顺便问下大家,Tm(1](/uploads/image/z/4630377-57-7.jpg?t=%E8%AF%A2%E9%97%AEPCR%E9%80%80%E7%81%AB%E6%B8%A9%E5%BA%A6%E8%AE%BE%E8%AE%A1%E5%BC%95%E7%89%A9%E5%8D%95%E4%B8%8A%E6%95%B0%E6%8D%AE%E5%A6%82%E4%B8%8B%E4%B8%8A%E6%B8%B8TTACAAGATGGAGCCTCACC%EF%BC%88GC%E5%90%AB%E9%87%8F50%25%EF%BC%89Tm%EF%BC%881M+Na%2B%EF%BC%89%EF%BC%9A68.2Tm%EF%BC%8850mM+Na%2B%EF%BC%89%EF%BC%9A46.6%E4%B8%8B%E6%B8%B8CAAAGAATAACCCAGGACGA%EF%BC%88GC%E5%90%AB%E9%87%8F45%25%EF%BC%89Tm%EF%BC%881M+Na%2B%EF%BC%89%EF%BC%9A66.2Tm%EF%BC%8850mM+Na%2B%EF%BC%89%EF%BC%9A44.6%E9%A1%BA%E4%BE%BF%E9%97%AE%E4%B8%8B%E5%A4%A7%E5%AE%B6%2CTm%EF%BC%881)
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询问PCR退火温度设计
引物单上数据如下
上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)
Tm(1M Na+):68.2
Tm(50mM Na+):46.6
下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)
Tm(1M Na+):66.2
Tm(50mM Na+):44.6
顺便问下大家,Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)有什么区别啊?
询问PCR退火温度设计引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+):68.2Tm(50mM Na+):46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+):66.2Tm(50mM Na+):44.6顺便问下大家,Tm(1
TM值是在一定buffer盐浓度情况下计算出来的.你需要查一下你的PCR体系里buffer盐的浓度,然后找相应的TM值.不过TM值也是一个估算值,举个例子,以你的正向引物而说,TTACAAGATGGAGCCTCACC.在primer5计算得到TM是54.0,DNASTAR是49.1.所以这个数值仅供参考,最稳妥的做法是用梯度PCR仪从55-65做一个梯度PCR.
PCR能不能做出来最关键的因素有两个,第一,模板质量如何,第二,引物3'是否有错配,gc含量如何.如果错配不严重的话,采用无脑梯度pcr的方法总能找到一个合适的退火温度.
对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度:
Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T)
复性温度=Tm值-(5~10℃)
在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30~60sec,足以使引物与模板之...
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对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度:
Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T)
复性温度=Tm值-(5~10℃)
在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30~60sec,足以使引物与模板之间完全结合。
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我也遇到了这种情况,我选择了与我用的酶的buffer中离子浓度相近的温度。结果挺理想。
但咱们做这个都知道,引物单子上给出的温度跟基因实际的扩增温度有一定差距。所以需要做温度及模板的梯度试验。
另外,我也会综合primar5 上给出的结果。
总之,一定要做梯度。...
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我也遇到了这种情况,我选择了与我用的酶的buffer中离子浓度相近的温度。结果挺理想。
但咱们做这个都知道,引物单子上给出的温度跟基因实际的扩增温度有一定差距。所以需要做温度及模板的梯度试验。
另外,我也会综合primar5 上给出的结果。
总之,一定要做梯度。
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