实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/28 05:14:08
![实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不](/uploads/image/z/3356762-50-2.jpg?t=%E5%AE%9E%E6%97%B6%E5%AE%9A%E9%87%8Fpcr%E5%86%85%E5%8F%82%E4%BB%A5%E5%8F%8A%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E6%A0%87%E5%87%86%E6%9B%B2%E7%BA%BF%E7%9A%84%E9%97%AE%E9%A2%98%E6%88%91%E6%9C%80%E8%BF%91%E5%9C%A8%E5%81%9Apcr%2C%E4%B8%8D%E8%BF%87%E8%BA%AB%E8%BE%B9%E6%B2%A1%E6%9C%89%E7%86%9F%E7%BB%83%E7%9A%84%E4%BA%BA%2C%E5%BE%88%E5%A4%9A%E5%9F%BA%E6%9C%AC%E9%97%AE%E9%A2%98%E6%90%9E%E4%B8%8D%E6%B8%85%E6%A5%9A%2C%E6%88%91%E7%94%A8SYBR+Green+%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E5%AE%9E%E6%97%B6%E5%AE%9A%E9%87%8Fpcr%2C%E7%9C%8B%E5%88%B0%E7%BD%91%E4%B8%8A%E8%AF%B4%E9%9C%80%E8%A6%81%E7%94%A8%E5%86%85%E5%8F%82%2C%E5%8F%AF%E6%98%AF%E7%94%A8%E5%86%85%E5%8F%82%E7%9A%84%E8%AF%9D%2C%E6%98%AF%E4%B8%8D%E6%98%AF%E9%9C%80%E8%A6%81%E7%94%A8%E4%B8%8D)
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么选择合适的样本?网上说需要一个富含内参和目的基因的样本并梯度稀释,最后根据这个曲线来比较不同样本中目的基因的差异.
额,超时了,补充一句
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
这个就是SYBR GREEN的局限了.你要做内参 话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.
内参的目的就是来对照加样误差的.
实际上,真正的内参是在同一个管子里面完成的.不过不是用SYBR GREEN来做的.而是用Taqman 引物和探针组合来做的.在同一个管子里面,同时加入你目的基因和内参基因的引物,而目的基因的探针使用FAM荧光素标记,而内参则使用VIC荧光素标记.这样反应同时进行,而且不受不同管子间加样误差的影响.
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的.你说的那个方法,不是标准曲线,仍然是相对浓度的梯度稀释而已.